Quistes óseos aneurismáticos. Terapia celular con células mononucleares y seguimiento imagenológico en dos pacientes adolescentes / Aneurysmal bone cysts. Mononuclear cell therapy and imaging follow-up in two adolescent patients

RESUMEN Los quistes óseos aneurismáticos son frecuentes en la edad pediátrica. Para su determinación se cuenta con diversos estudios imagenológicos como la radiografía y la tomografía axial computarizada que pueden colaborar al diagnóstico diferencial con otras lesiones. Existen disímiles opciones terapéuticas, el uso de factores de crecimiento autólogos se ha considerado como alternativa eficaz. Se presentan dos pacientes consultados en el servicio de Ortopedia del Hospital Provincial Pediátrico Universitario «José Luis Miranda¼, de Villa Clara, con diagnóstico clínico e imagenológico de quiste óseo aneurismático que recibieron tratamiento mediante terapia celular con células mononucleares con buena evolución clínica y radiográfica. Esta técnica es aplicable en nuestro medio ya que no requiere de estimables recursos materiales lo que constituye una fortaleza para su implementación. Las radiografías permiten reconocer la evolución posterior al tratamiento.

ABSTRACT Aneurysmal bone cysts are common in children. For its determination, various imaging studies are available, such as radiography and computerized axial tomography, which can collaborate in the differential diagnosis with other lesions. There are dissimilar therapeutic options, the use of autologous growth factors has been considered as an effective alternative. We present two patients seen in the Orthopedics service at "José Luis Miranda" University Pediatric Hospital in Villa Clara, with a clinical and imaging diagnosis of aneurysmal bone cyst who received treatment with mononuclear cell therapy having a good clinical and radiographic evolution. This technique is applicable in our environment since it does not require considerable material resources, which constitutes a strength for its implementation. X-rays allow us to recognize the evolution after treatment.

Efecto del extracto vegetal JV-001 sobre elementos sanguíneos concapacidad fagocítica / Effect of the plant extract JV-001 on blood elements with phagocytic capacity

INTRODUCCIÓN: La respuesta inmune combina una serie de señales y mecanismos complejos para producirse, las que pueden ser moduladas y potenciadas. Esto, según el conocimiento popular es posible empleando extractos vegetales, siendo uno el extracto vegetal JV-001. Éste demostró, en estudios previos, la capacidad de activar y mejorar la respuesta inmune celular de origen murino, pero su efecto a nivel leucocitario humano es desconocido; debido a esto, el objetivo de la investigación fue estudiar el efecto del JV-001 en leucocitos humanos. MATERIAL Y MÉTODO: Para este trabajo se extrajo sangre heparinizada a varones sanos, ésta fue tratada, en primera instancia, con NH-4Cl 64 por ciento para obtener leucocitos totales, y en otra, separada su fracción mononuclear mediante gradiente de Histopaque®. Las células obtenidas se ajustaron a 8x106; alicuotas de 100 uL de JV-001 o PBS. La placa se incubó a 37ºC por 30 minutos, luego se lavaron y la peroxidasa remanente en cada pocillo se determinó revelándola con Ortofenilendiamina y H2O2, expresando lo obtenido como absorbancia leída a 450 nm. RESULTADOS: Se identificó un aumento en la adhesión de leucocitos totales entre un 44,35 por ciento y 63,3 por ciento expresado mediante la obtención de un delta positivo de absorbancia con respecto a los controles. DISCUSIÓN: Se desconoce el mecanismo que incrementa la adhesión, pero probablemente obedece al aumento en la expresión de integrinas. Es relevante destacar que este aumento no ocurre al incubar las células mononucleares o polimorfonucleares por separado, sugiriendo que el principio activo de JV-001 no actúa directa ni únicamente sobre células adherentes.

INTRODUCTION: The immune response combines a series of signals and complex mechanisms to occur, which can be modulated and enhanced. This one according the popular knowledge is possible using plant extracts, being one of them the plant extract JV-001. This showed, in previous studies, the ability to activate and enhance the cellular immune response of murine origin, but its effect on human leukocyte level is unknown, so the objective of this work was to study the effect of JV-001 in human leukocytes. MATERIAL AND METHOD: In this paper was used heparinized blood of healthy males, at first instance, this was treated with NH4Cl 64 percent to obtain total leukocytes, and in another, separate the mononuclear fraction by Histopaque®gradient. The cells obtained were adjusted to 8x106; aliquots of 100 uL of JV-001 or PBS. The plate was incubated at 37ºC for 30 minutes and then washed, the peroxidase remaining in each recipient was revealed and determined with Orthophenylenediamine and H2O2, expressing the proceeds as absorbance read at 450 nm. RESULTS: The results showed an increase in total leukocyte adhesion between 44.35 percent and 63.3 percent expressed by obtaining a positive delta absorbance with respect to controls. DISCUSSION: The mechanism that increases the adhesion is unknown, but probably due to increased expression of integrins. It is important to note that this increase does not occur upon incubation of mononuclear or polymorphonuclear cells separately, suggesting that the active principle of JV-001 not only does not act directly on adherent cells.

Determinación de cobre, magnesio y zinc en leucocitos mononucleares mediante espectrometría de absorción atómica con llama / Determination of copper, magnesium and zinc in mononuclear leukocytes by flame atomic absorption spectrometry

En este trabajo se evaluó un nuevo microinyector de inyección en flujo para la determinación de Cu, Mg y Zn en células mononucleares de la sangre. Este dispositivo permitió analizar muestras en el orden de microlitros mediante espectrometría de absorción atómica con llama, es fácil de construir y adaptar al inyector convencional del espectrofotómetro de absorción atómica. En la determinación de Cu, Mg y Zn se obtuvieron límites de detección de 106, 65 y 37 µg L-1,respectivamente. En las pruebas de recuperación de estos elementos en leucocitos mononucleares se encontraron porcentajes de recuperación entre 98 y 110%.

In this paper we evaluated a new micro-flow injector for the determination of the concentrations of Cu, Mg and Zn in mononuclear blood cells. This device analyzed sample volumes in the order of microliters by flame atomic absorption spectrometry; it is inexpensive, and easy to build and to adapt to the conventional injector of the atomic absorption spectrophotometer. Detection limits of 106, 65 and 37 µg L-1 for Cu, Mg and Zn were obtained, respectively. The percentages of recovery tests were found between 98 and 110%.

Evaluación de la respuesta inmunológica del Apis Mellifica homeopatizada en cultivos de células mononucleares en sangre periférica / Evaluation of the immune response of the homeopathized Apis Mellifica in cultures of mononuclear cells in peripheral blood

Introducción: La Apis Mellifica, uno de los medicamentos homeopáticos utilizado por la homeopatía que tiene efectos sobre al sistema inmune, por ejemplo: actúa sobre la basófilos, provocando una inhibición en la liberación de histamina. El objetivo de este estudio es evaluar la respuesta de las células mononucleares frente al Apis Mellifica homeopatizada. Materiales y Métodos: La medición de los niveles de las citoquinas IL-1ß, IL- 2, IL-4, IL-6, IL-8 e IL-10, se determinaron cuando las células mononucleares en sangre periférica humana se expusieron al Apis Mellifica homeopatizada a la potencia 30 CH, mediante el ensayo "Cytokine Human Panel" de Invitrogen®. Resultados: Las células mononucleares crecieron un 18% en comparación con el grupo control, mostrando efectos mitogénicos del Apis Mellifica homeopatizada sobre las células mononucleares. Los resultados de los niveles de citoquinas IL-1ß,IL- 2, IL-4, IL-6, IL-8 e IL-10, medidos en el equipo de Luminex®, no evidencio modificación estadísticamente significativa de las mismas por parte del Apis Mellifica homeopatizada. Conclusiones: Los resultados del estudio mostraron un efecto estimulante de proliferación de las células mononucleares expuestas al Apis Mellifica homeopatizada, este estudio, deja la puerta abierta, para la realización de nuevos estudios.

Effect of L-Arginine and L-NAME treatments on polymorphonuclear leukocytes and mononuclear cells influx during tumor growth / Efeito dos tratamentos com L-Arginina e L-NAME sobre o influxo de leucócitos polimorfonucleares e células mononucleares durante o desenvolvimento tumoral

PURPOSE: Evaluate polymorphonuclear leukocytes (PMN's) and mononuclear cells (MN's) involvement in the Ehrlich´s solid tumor (ET) growth. METHODS: 90 Swiss mice were inoculated with 10(7) tumor cells (sc), distributed in three groups and treated once a day, via intraperitoneal (ip), with 0.1ml of diluent, L-Arginine (20mg/Kg) or L-NAME (20mg/Kg). After 7, 15 and 30 days of treatment, ten animals of each group were euthanized, the tumor mass was removed, processed and fixed for HE. Later, a morphometric analysis of the total area, parenchyma, necrosis, tumor stroma and PMN's leukocytes and MN's cells influx was performed. RESULTS: The L-Arginine treatment increased PMN's influx in the initial stage, whereas L-NAME reduced it. Our data suggests that NO effect on PMN's migration is dose-dependent. On the other hand, the MN´s cells influx was reduced by L-NAME treatment at all evaluated periods and at the same periods an increase in tumor growth was observed. CONCLUSION: At initial stages of tumor implantation, both PMN's leukocytes and MN's cells act together to control ET development.

OBJETIVO: Avaliar o envolvimento de leucócitos polimorfonucleares (PMN's) e células mononucleares (MN's) no crescimento do Tumor Sólido de Ehrlich (TE). MÉTODOS: 90 camundongos Suíços foram inoculados com 10(7) células tumorais (sc), distribuídos em três grupos e tratados uma vez ao dia, via intraperitoneal (ip), com 0.1ml de diluente, L-Arginina (20mg/Kg) ou L-NAME (20mg/Kg). Após 7, 15 e 30 dias, dez animais de cada grupo foram eutanasiados, a massa tumoral foi removida, processada e corada pela HE. Posteriormente, foi realizada análise morfométrica das áreas total, parênquima, necrose, estroma e influxo de leucócitos PMN's e células MN's. RESULTADOS: O tratamento com L-Arginina favoreceu o influxo de PMN's em períodos iniciais, enquanto o tratamento com L-NAME o reduziu. Nosso estudo sugere que o efeito do ON sobre a migração de PMN's é dose-dependente. Por outro lado, o influxo de células MN´s foi contido pelo tratamento com L-NAME em todos os períodos avaliados, mesmos períodos em que se observou um aumento no crescimento tumoral. CONCLUSÃO: Em fases iniciais do implante tumoral, ambos, leucócitos PMN's e células MN's, atuam juntos no controle do desenvolvimento do TE.